เกี่ยวกับเครื่องมือนี้
ป้อนลำดับไพรเมอร์เพื่อประมาณอุณหภูมิหลอมเหลว (Tm) ซึ่งเป็นอุณหภูมิที่ครึ่งหนึ่งของดูเพล็กซ์เป็นสายเดี่ยว ลำดับจะถูกแปลงเป็นตัวพิมพ์ใหญ่และลดเหลือ A, C, G, T และ U ก่อนที่จะนับเบส ทุกอย่างคำนวณในเบราว์เซอร์ของคุณ
วิธีพื้นฐานใช้กฎ Wallace สำหรับไพรเมอร์สั้น (ต่ำกว่า 14 นิวคลีโอไทด์): Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C) สำหรับไพรเมอร์ที่มี 14 เบสขึ้นไป จะเปลี่ยนไปใช้สูตรที่อิงกับ GC คือ Tm = 64.9 + 41 × (GC − 16.4) / ความยาว วิธีปรับตามเกลือใช้ Tm = 81.5 + 0.41 × GC% − 675 / ความยาว + 16.6 × log10([Na⁺]) โดยความเข้มข้นโซเดียมป้อนเป็นมิลลิโมลาร์ เพื่อคำนึงถึงสภาวะบัฟเฟอร์
จะมีอุณหภูมิ annealing ที่แนะนำประมาณ Tm − 5 °C เป็นจุดเริ่มต้นเชิงปฏิบัติสำหรับ PCR พร้อมกับ GC% และความยาวของไพรเมอร์ ตัวอย่างเช่น 8-mer ATGCATGC (4 A/T และ 4 G/C) ให้ Wallace Tm = 2×4 + 4×4 = 24 °C