درباره این ابزار
یک توالی پرایمر وارد کنید تا دمای ذوب آن (Tm) تخمین زده شود، دمایی که در آن نیمی از دوپلکس تکرشته میشود. توالی پیش از شمارش بازها به حروف بزرگ تبدیل و به A، C، G، T و U کاهش مییابد. همه چیز در مرورگر شما محاسبه میشود.
روش پایه از قانون Wallace برای پرایمرهای کوتاه (کمتر از ۱۴ نوکلئوتید) استفاده میکند: Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C). برای پرایمرهای ۱۴ باز یا بیشتر به فرمول مبتنی بر GC یعنی Tm = 64.9 + 41 × (GC − 16.4) / طول تغییر میکند. روش تصحیحشده با نمک Tm = 81.5 + 0.41 × GC% − 675 / طول + 16.6 × log10([Na⁺]) را اعمال میکند، که در آن غلظت سدیم به میلیمولار وارد میشود، تا شرایط بافر را در نظر بگیرد.
یک دمای اتصال پیشنهادی حدود Tm − 5 °C بهعنوان یک نقطه شروع عملی برای PCR ارائه میشود، همراه با درصد GC و طول پرایمر. برای مثال، ۸مر ATGCATGC (۴ عدد A/T و ۴ عدد G/C) یک Tm والاس برابر با 2×4 + 4×4 = 24 °C میدهد.